莖尖培養(yǎng)是把莖尖的分生組織或包括有此分生組織的莖尖分離進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)的方法。在植物組織的培養(yǎng)中,曾是很早以來(lái)就被應(yīng)用的一種方法,莖尖培養(yǎng)除研究枝條的發(fā)育和花的形態(tài)形成外,也應(yīng)用于無(wú)病毒植物的培養(yǎng)和蘭花等園藝作物的營(yíng)養(yǎng)繁殖等方面,目前此方式是生產(chǎn)無(wú)毒苗最基本的方法,下面簡(jiǎn)單介紹。
1、外植體的選取及預(yù)處理
⑴外植體選取
選取生長(zhǎng)健壯、已發(fā)芽、長(zhǎng)勢(shì)較好、無(wú)病害的生姜根狀莖作為外植體。
⑵材料預(yù)處理
取帶芽的枝條或鱗莖球莖,洗衣粉適量沖洗,然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位,頂芽和腋芽、大芽和小芽分開(kāi)。繼續(xù)用洗衣粉清洗10分鐘,清洗時(shí)需不?;蝿?dòng)。再用自來(lái)水沖洗干凈,置空培養(yǎng)瓶備用。
2、超凈工作臺(tái)無(wú)菌操作準(zhǔn)備
檢查超凈工作臺(tái),是否已開(kāi)機(jī)滅菌,酒精燈、酒精瓶、升汞是否齊備、無(wú)菌水、培養(yǎng)瓶放置與位置、接種器械是否齊備與放置。
3、外植體消毒
⑴蒸餾水沖洗
外植體置于已殺菌開(kāi)機(jī)的超凈工作臺(tái)上,新潔爾滅洗液消毒雙手,無(wú)菌蒸餾水清洗外植體2-3次,需隨時(shí)晃動(dòng)。
⑵酒精消毒
75%酒精倒入裝外植體的容器內(nèi),消毒外植體5-60s,時(shí)間長(zhǎng)短視植物材料情況而定,一般幼嫩材料和室內(nèi)帶菌培養(yǎng)材料消毒時(shí)間短,老材料或室外材料消毒時(shí)間長(zhǎng)。動(dòng)作一定迅速,需晃動(dòng),然后將酒精倒去。整個(gè)時(shí)間計(jì)算以酒精傾倒開(kāi)始至酒精倒出瓶外為止。
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