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紫葉李休眠芽離體誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)
艾邁特園林11月22日資訊： 紫葉李（Prunusceraiferacv.pissardii）為落葉小喬木，是薔薇科李屬的一個(gè)栽培品種，其葉片自春季萌發(fā)至秋季落葉始終呈紫紅色，尤以春夏季最為鮮艷，被廣泛應(yīng)用于園林中，是我國(guó)北方地區(qū)著名的觀葉樹種。目前紫葉李多以嫁接方式繁殖，需用山桃作為砧木，繁殖速度較慢，且過(guò)程復(fù)雜，成活率低，因此尋找一種快捷高效的繁殖方法對(duì)于紫葉李生產(chǎn)非常重要。本研究采用紫葉李的休眠芽作為外植體進(jìn)行離體繁殖技術(shù)研究，旨在為紫葉李高效離體繁殖提供依據(jù)。
1材料與方法
1.1材料
2011年11月于吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院校園內(nèi)6年生紫葉李樹木上采集帶休眠芽的枝條。
1.2方法
1.2.1外植體處理將采集的枝條帶回實(shí)驗(yàn)室，截成長(zhǎng)1～2cm的小段，每段帶芽，在準(zhǔn)備室內(nèi)先用流水沖洗20min，瀝干水后放入0.1%HgCl2溶液中消毒5～8min，倒去消毒液，用蒸餾水沖洗3～4次，瀝干水放入接種室的超凈工作臺(tái)。接種前在超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%乙醇浸泡30min，再用蒸餾水沖洗3～4次，用消毒過(guò)的藥棉拭干，分別采用4種方法切割芽：A1:將芽從枝上切除下來(lái)，在雙筒解剖鏡下用解剖刀將芽苞撥去鱗片，露出頂端分生組織，保留2～4mm葉原基；A2:將芽從枝上切除下來(lái)后，將芽苞一切兩半，保留芽苞的上半部分；A3:將芽從枝上切除下來(lái)后，保留完整，稍加修剪；A4:將帶芽苞的枝條修剪成長(zhǎng)1cm左右，保留位于枝條小段上半部的1個(gè)芽苞。
1.2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基采用5種配比，均以MS作為基本培養(yǎng)基，添加不同比例的6－BA或KT，添加蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)為5.8，各培養(yǎng)基分別記作：B1:MS+6－BA0.5mg/L+KT0.01mg/L;B2:MS+6－BA0.5mg/L+KT0.02mg/L;B3:MS+6－BA1.0mg/L+KT0.01mg/L;B4:MS+6－BA1.0mg/L+KT0.02mg/LB5:MS+6－BA1.5mg/L+KT0.01mg/L。
1.2.3培養(yǎng)條件人為控制培養(yǎng)室環(huán)境，誘導(dǎo)階段將培養(yǎng)室溫度控制在15～30℃之間，濕度控制在80%左右，光照強(qiáng)度為1500～2000lx，光照時(shí)間12h/d
2結(jié)果與分析
2.1外植體不同處理對(duì)紫葉李芽苞萌發(fā)的影響將“1.2.1”中4種休眠芽分別接種到5種配方培養(yǎng)基上，每瓶接1塊原材料，每種培養(yǎng)基接50瓶，每種處理接250瓶，共接1000瓶，30d后調(diào)查芽苞誘導(dǎo)情況（表1）。
由表1可知，A1處理的芽苞萌發(fā)率最多，達(dá)到85.71%。A1處理的外植體在5種培養(yǎng)基上均能正常萌發(fā)，萌發(fā)后的幼芽能迅速正常生長(zhǎng)，并能形成試管小植株，幼芽基部有愈傷組織形成；A2處理的外植體始終沒(méi)有萌發(fā)，外植體由于缺少營(yíng)養(yǎng)逐漸干枯死亡；A3處理的外植體芽萌發(fā)生長(zhǎng)，10d后干枯死亡；A4處理的外植體葉片萌發(fā)后，20d左右由于缺少營(yíng)養(yǎng)干枯死亡。由此可知，A1為最佳的外植體處理方法。
2.2不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)紫葉李芽苞萌芽的影響
將經(jīng)過(guò)A1處理的外植體重新接種到5種誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基接種100瓶，共500瓶，每瓶1塊外植體，30d調(diào)查芽苞萌發(fā)情況。
由表2可知，A1處理后的外植體在5種培養(yǎng)基上均能萌發(fā)，萌發(fā)率均大于50%，但5種培養(yǎng)基中的萌發(fā)情況不同。外植體在B2中的萌發(fā)率最高，達(dá)到98.99%，B1萌發(fā)率最低，為63.26%，說(shuō)明B2培養(yǎng)基是較理想的紫葉李芽誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基。
3結(jié)果與討論
目前關(guān)于紫葉李的離體培養(yǎng)方案研究較少，而在木本植物的離體培養(yǎng)中，外植體的誘導(dǎo)階段即初代培養(yǎng)階段最為重要，因此本試驗(yàn)主要針對(duì)初代培養(yǎng)階段的外植體處理及誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方進(jìn)行研究，采用休眠芽作為外植體，可以打破反季節(jié)外植體材料來(lái)源少的局限，另外滅菌相對(duì)容易，能降低接種污染率。本研究表明，采用剝?nèi)プ先~李的休眠芽鱗片，露出葉原基2～4mm的處理方法進(jìn)行接種萌芽率最高，芽誘導(dǎo)階段采用MS+6－BA0.5mg/L+KT0.02mg/L配方培養(yǎng)效果最好。
1材料與方法
1.1材料
2011年11月于吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院校園內(nèi)6年生紫葉李樹木上采集帶休眠芽的枝條。
1.2方法
1.2.1外植體處理將采集的枝條帶回實(shí)驗(yàn)室，截成長(zhǎng)1～2cm的小段，每段帶芽，在準(zhǔn)備室內(nèi)先用流水沖洗20min，瀝干水后放入0.1%HgCl2溶液中消毒5～8min，倒去消毒液，用蒸餾水沖洗3～4次，瀝干水放入接種室的超凈工作臺(tái)。接種前在超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%乙醇浸泡30min，再用蒸餾水沖洗3～4次，用消毒過(guò)的藥棉拭干，分別采用4種方法切割芽：A1:將芽從枝上切除下來(lái)，在雙筒解剖鏡下用解剖刀將芽苞撥去鱗片，露出頂端分生組織，保留2～4mm葉原基；A2:將芽從枝上切除下來(lái)后，將芽苞一切兩半，保留芽苞的上半部分；A3:將芽從枝上切除下來(lái)后，保留完整，稍加修剪；A4:將帶芽苞的枝條修剪成長(zhǎng)1cm左右，保留位于枝條小段上半部的1個(gè)芽苞。
1.2.2誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基采用5種配比，均以MS作為基本培養(yǎng)基，添加不同比例的6－BA或KT，添加蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH值調(diào)節(jié)為5.8，各培養(yǎng)基分別記作：B1:MS+6－BA0.5mg/L+KT0.01mg/L;B2:MS+6－BA0.5mg/L+KT0.02mg/L;B3:MS+6－BA1.0mg/L+KT0.01mg/L;B4:MS+6－BA1.0mg/L+KT0.02mg/LB5:MS+6－BA1.5mg/L+KT0.01mg/L。
1.2.3培養(yǎng)條件人為控制培養(yǎng)室環(huán)境，誘導(dǎo)階段將培養(yǎng)室溫度控制在15～30℃之間，濕度控制在80%左右，光照強(qiáng)度為1500～2000lx，光照時(shí)間12h/d
2結(jié)果與分析
2.1外植體不同處理對(duì)紫葉李芽苞萌發(fā)的影響將“1.2.1”中4種休眠芽分別接種到5種配方培養(yǎng)基上，每瓶接1塊原材料，每種培養(yǎng)基接50瓶，每種處理接250瓶，共接1000瓶，30d后調(diào)查芽苞誘導(dǎo)情況（表1）。
由表1可知，A1處理的芽苞萌發(fā)率最多，達(dá)到85.71%。A1處理的外植體在5種培養(yǎng)基上均能正常萌發(fā)，萌發(fā)后的幼芽能迅速正常生長(zhǎng)，并能形成試管小植株，幼芽基部有愈傷組織形成；A2處理的外植體始終沒(méi)有萌發(fā)，外植體由于缺少營(yíng)養(yǎng)逐漸干枯死亡；A3處理的外植體芽萌發(fā)生長(zhǎng)，10d后干枯死亡；A4處理的外植體葉片萌發(fā)后，20d左右由于缺少營(yíng)養(yǎng)干枯死亡。由此可知，A1為最佳的外植體處理方法。
2.2不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基對(duì)紫葉李芽苞萌芽的影響
將經(jīng)過(guò)A1處理的外植體重新接種到5種誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基接種100瓶，共500瓶，每瓶1塊外植體，30d調(diào)查芽苞萌發(fā)情況。
由表2可知，A1處理后的外植體在5種培養(yǎng)基上均能萌發(fā)，萌發(fā)率均大于50%，但5種培養(yǎng)基中的萌發(fā)情況不同。外植體在B2中的萌發(fā)率最高，達(dá)到98.99%，B1萌發(fā)率最低，為63.26%，說(shuō)明B2培養(yǎng)基是較理想的紫葉李芽誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基。
3結(jié)果與討論
目前關(guān)于紫葉李的離體培養(yǎng)方案研究較少，而在木本植物的離體培養(yǎng)中，外植體的誘導(dǎo)階段即初代培養(yǎng)階段最為重要，因此本試驗(yàn)主要針對(duì)初代培養(yǎng)階段的外植體處理及誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方進(jìn)行研究，采用休眠芽作為外植體，可以打破反季節(jié)外植體材料來(lái)源少的局限，另外滅菌相對(duì)容易，能降低接種污染率。本研究表明，采用剝?nèi)プ先~李的休眠芽鱗片，露出葉原基2～4mm的處理方法進(jìn)行接種萌芽率最高，芽誘導(dǎo)階段采用MS+6－BA0.5mg/L+KT0.02mg/L配方培養(yǎng)效果最好。
標(biāo)簽：紫葉李休眠芽離體誘導(dǎo)培養(yǎng)技術(shù)
